背景:研究表明骨肉瘤的发生与多种miRNAs的异常表达有关,外泌体miRNA在细胞内通讯中受到越来越多的关注。目的:探讨骨肉瘤细胞来源外泌体miR-1307对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:购买人骨肉瘤细胞系(143B、MG63、U2OS、Saos-2和SW1353)和人正常成骨细胞系(hFOB 1.19)。通过qRT-PCR实验检测miR-1307在5种骨肉瘤细胞系和正常成骨细胞系中的表达水平,最终选择SW1353作为此次骨肉瘤细胞功能验证的细胞系。培养SW1353骨肉瘤细胞和正常成骨细胞,通过差速离心法提取骨肉瘤细胞外泌体和正常成骨细胞外泌体,然后将miR-1307 inhibitor、miR-NC mimic转染至SW1353骨肉瘤细胞和正常成骨细胞,再提取SW1353骨肉瘤细胞外泌体和正常成骨细胞外泌体。取25 mg/L上述外泌体加入SW1353骨肉瘤细胞中干预24 h,采用CCK-8实验和流式细胞术观察骨肉瘤细胞的增殖和凋亡情况,使用Targetscan、MiRBase和miRDIP数据库在线预测miR-1307的靶基因,通过荧光素酶报告基因实验测定荧光素酶活性。使用qRT-PCR和Western blot检测骨肉瘤细胞中AGAP1的mRNA和蛋白表达水平。结果与结论:①与hFOB 1.19成骨细胞外泌体相比,SW1353骨肉瘤细胞外泌体明显促进骨肉瘤细胞增殖并抑制凋亡(P<0.01);与SW1353骨肉瘤细胞外泌体相比,SW1353骨肉瘤细胞外泌体中miR-1307下调后,对SW1353骨肉瘤细胞的增殖作用明显降低而凋亡率明显升高(P<0.01);②AGAP1被验证为miR-1307的直接靶基因,过表达miR-1307骨肉瘤细胞的AGAP1 mRNA和蛋白表达水平均明显低于miR-NC组(P<0.01)。与miR-NC组相比,miR-1307明显抑制野生型PGLO-AGAP1-WT 3'-UTR的荧光素酶活性(P<0.05);③结果表明,SW1353骨肉瘤细胞外泌体miR-1307通过靶向AGAP1促进SW1353骨肉瘤细胞的增殖并抑制凋亡。

文章来源：《中国实验血液学杂志》 网址: http://www.zgsyxyxzz.cn/qikandaodu/2020/1210/520.html